药品微生物检验常见问题问答集锦（二）
发布时间：2020-05-28
问：无菌检查法中，为什么培养基灵敏度检查用了铜绿假单胞菌，而方法适用性以大肠埃希菌为验证菌株？
问：什么是不可接受微生物？
答：不可接受微生物通常是指那些已知有明显致病性的，存在足够的数量，通过产品的给药途径可能导致患者不可接受风险的微生物。如何确定一种微生物是不可接受的，需要进行风险分析，包括微生物负载量、微生物特性、产品特性、给药途径、对患者潜在影响等。问： 培养基灭菌没有按照厂家提供的灭菌参数进行，是否可行？
答：可以。厂家产品说明书提供的灭菌参数可作为参考使用，使用单位也可以根据自己实验室的实际情况，在相关法规要求内，使用自己验证过的灭菌参数来执行。【法规来源：中国药典2015版9203药品微生物实验室质量管理指导原则 ……培养基灭菌应按照生产商提供或使用者验证的参数进行……】
问：草酸钾兔血浆和兔血浆的用途分别是什么？
答：草酸钾兔血浆用于溶血性链球菌链激酶试验，致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使生成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。此实验乙型溶血性链球菌阳性，金黄色葡萄球菌阴性。
兔血浆用于金黄色葡萄球菌的血浆凝固酶试验。细菌生成血浆凝固酶后释放于血浆中，称为游离凝固酶，不直接作用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂（即凝固酶致活因子）激活后变成耐热的凝固酶样物质，此物质纤维蛋白原变为固态纤维蛋白，血浆因而凝固。致病性葡萄球菌能产生凝固酶，例金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性。
问：革兰氏染色有哪些注意事项？
答：（1）最好挑选18-24h的菌落进行革兰氏染色,培养时间过久的的革兰氏阳性细菌可能会被染成红色而造成假阴性。（2）挑取适量的菌，不宜过多,均匀涂开。
（3）乙醇脱色是革兰氏染色是否成功的关键,15-30s为宜，脱色不够可能会造成假阳性,脱色过度可能会造成假阴性。
问：如何根据实验需要制备斜面？
答：根据实验需求，摆放斜面一般有三种形式：
（1）长斜面：斜面底部刚覆盖试管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA传代斜面。
（2）高层斜面：斜面与底层高度约为2:3，即底部高约3cm，斜面长度约2cm；如三糖铁高层斜面。
（3）普通斜面：斜面底部距试管底部约1cm，上部距管口约2.5-3cm。
问：三糖铁培养基颜色变化原理是什么？
答：该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，分解葡萄糖产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如菌种接至培养基培养后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
问：如果三糖铁上斜面红色、底层黄色，中间有黑色且产气，能否判定为沙门菌？
答：不能。某些非沙门菌也能在三糖铁上呈现和沙门菌一样的颜色变化，例如奇异变形杆菌。如三糖铁上有上述颜色变化，需要进一步的进行适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果采用传统的生化鉴定，可参考GB 4789.4-2016中沙门氏菌检验的方法。
问： 按照中国药典2015版1106控制菌检查法检测大肠埃希氏菌，如果麦康凯琼脂上有疑似菌，如何用传统方法确证？
答：挑选疑似菌分离、纯化。
（1）革兰氏染色：革兰氏阴性无芽孢杆菌；
（2）乳糖发酵试验：产酸产气或产酸不产气；
（3）IMVIC试验结果：++--或-+--；
判定检出大肠埃希氏菌。
问： 按照中国药典2015版1106控制菌检查法检测铜绿假单胞菌时，溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基中加入甘油的作用是什么？
答：作为碳源补充，有利于绿脓菌素的生成。
原文链接：https://mp.weixin.qq.com/s/CIZQyZL_4bu1IwwjBKeCHA
上一篇：药品微生物检验常见问题问答集锦（一）
下一篇：关于洋葱伯克霍尔德菌，你了解多少？
